PESQUISA VETERINÁRIA BRASILEIRA

Abstract in English:

The importance of the hoof to the horse health is clear, and the current knowledge regarding the cellular aspects of hoof keratinocytes is poor. Studies on equine keratinocyte culture are scarce. Developing keratinocyte cultures in vitro is a condition for studies on molecular biology, cell growth and differentiation. Some methods have already been established, such as those for skin keratinocyte culture. However, few methodologies are found for lamellar keratinocytes. The objective of this study was to standardize the equine hoof keratinocyte isolation and cultivation, and then characterize the cell immunophenotype. For this, the primary culture method used was through explants obtained from three regions of the equine hoof (medial dorsal, dorsal, and lateral dorsal). After the cell isolation and cultivation, the cell culture and its explants were stained with anti-pan cytokeratin (pan-CK) (AE1/AE3), vimentin (V9), p63 (4A4), and Ki-67 (MIB-1) antibodies. Cells were grown to third passage, were positive for pan-CK, p63 and Ki-67, and few cells had vimentin positive expression. As for the explants, the epidermal laminae were not stained for vimentin or Ki-67. However, some cells presented positive pan-CK and p63 expression. This study demonstrated the viability of lamellar explants of equine hooves as a form of isolating keratinocytes in primary cultures, as well as characterized the proliferation ability of such keratinocytes in monolayers.

• Isolation cultivation immunofluorescence lamellar keratinocytes equine hoof cell migration culture technology skin tissue engineering

Abstract in Portuguese:

É notória a importância do casco na saúde dos equinos, mas o conhecimento em nível celular é pouco entendido. Estudos envolvendo o cultivo de queratinócitos equinos são escassos. Sabe-se que o desenvolvimento de cultivos de queratinócitos in vitro é uma condição para estudos sobre a biologia molecular, crescimento e diferenciação celular. Alguns métodos já estão estabelecidos, como para cultivo de queratinócitos de pele, mas poucas metodologias são encontradas para queratinócitos lamelares. O objetivo desse estudo foi padronizar o cultivo de queratinócitos provenientes de casco equino visando futuramente associar ao estudo da medicina regenerativa para assim estabelecer um modelo experimental in vitro e indicar o uso criterioso de terapias regenerativas para a laminite equina. Desta forma, o cultivo em monocamada e a caracterização de queratinócitos lamelares foram realizados. Para isso, o método de cultura primária utilizado foi através de explantes obtidos de três regiões do casco (dorso-medial, dorsal e dorso-lateral). As células foram caracterizadas para os marcadores anti pan-cytokeratin (AE1/AE3), vimentin (V9), p63 (4A4) e Ki-67 (MIB-1) nos cultivos e nos explantes. As  células foram cultivadas até terceira passagem, tendo marcação positiva para pan-CK, p63 e Ki-67 e fraca marcação para vimentina. Já as lâminas epidermais não tiveram marcação de vimentin e Ki-67, porém marcaram acentuadamente para pan-CK e p63. Este estudo demonstrou a exiquibilidade do uso de explantes lamelares do casco de equinos, como forma de isolamento de queratinócitos em cultivos primários, bem como caracterizou a habilidade de proliferação desses queratinócitos em monocamada.

• Isolamento cultivo imunofluorescência queratinócitos lamelares casco equino migração celular tecnologia de cultivo engenharia tecidual

Abstract in English:

ABSTRACT.- Oliveira L.S., Barreto-Vianna A.R.C., Leonardo A.S., Godoy R.F. & Lima E.M.M. 2014. Morphometry of primary and secondary epidermal laminae in equine hoof. Pesquisa Veterinária Brasileira 34(1):79-82. Departamento de Anatomia Veterinária, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Universidade de Brasília, ICC, Ala Sul, Campus Darcy Ribeiro, Cx. Postal 4508, Brasília, DF 70760-701, Brazil. E-mail: limaemm@unb.br We studied the length of primary and secondary epidermal laminae of the toe and the lateral and medial quarters of horses, distributed into proximal, middle and distal thirds of the hooves. Eight limbs from adult crossbred horses, four females and four males, used to pull carts without pedal conditions. Fragments were taken from different regions of the hooves and subjected to conventional histological techniques. The samples were stained with hematoxylin-eosin and analyzed by light microscopy. The primary epidermal laminae were higher in the hooves of forelimbs compared to hindlimbs in the proximal and middle thirds and the regions of the medial quarter and toe. The secondary laminae were higher in forelimb of the middle third and medial quarter. Comparing the length of the epidermal laminae between hoof parts, it was seen that the primary laminae are lower in the proximal third and higher in the toe, while the secondary laminae are lower in the proximal third and medial quarter. The results suggested that the morphology of the laminae in the different regions of the hooves is influenced through the work performed by the animal, as well as through the different distribution of forces.

• Hoof epidermal laminae podologia equina casco lâminas epidérmicas

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Oliveira L.S., Barreto-Vianna A.R.C., Leonardo A.S., Godoy R.F. & Lima E.M.M. 2014. Morphometry of primary and secondary epidermal laminae in equine hoof. [Morfometria das lâminas epidérmicas primárias e secundárias do casco de equinos.] Pesquisa Veterinária Brasileira 34(1):79-82. Departamento de Anatomia Veterinária, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Universidade de Brasília, ICC, Ala Sul, Campus Darcy Ribeiro, Cx. Postal 4508, Brasília, DF 70760-701, Brazil. E-mail: limaemm@unb.br Foi estudado o comprimento das lâminas epidérmicas primárias e secundárias da pinça e dos quartos lateral e medial, distribuídas nos terços proximal, médio e distal dos cascos de equinos. Utilizaram-se os membros de oitos cavalos adultos utilizados para tração de carroças, que não apresentavam afecções podais, sendo quatro fêmeas e quatro machos, sem raça definida. Fragmentos foram retirados das diferentes regiões dos cascos e submetidos à técnica histológica convencional. As amostras foram coradas com H&E e analisadas em microscópio óptico. As lâminas epidérmicas primárias apresentaram-se maiores nos cascos dos membros torácicos em relação aos membros pélvicos nos terços proximal e médio e nas regiões do quarto medial e na pinça. As lâminas secundárias foram maiores também no membro torácico no terço médio e no quarto medial. Comparando-se o comprimento das lâminas epidérmicas entre as regiões do casco, observou-se que as lâminas primárias são menores no terço proximal e maiores na pinça, enquanto as menores lâminas secundárias estão no terço proximal e no quarto medial. Os resultados sugerem que a morfologia das lâminas nas diversas regiões do casco sofra influência do trabalho realizado pelo animal, assim como, das diferentes distribuições de força existentes no mesmo.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Barreto-Vianna A.R.C., Oliveira L.S., Leonardo A.S., Santana M.I., Godoy R.F. & Lima E.M.M. 2013. Density of primary and secondary epidermal laminae of equine hoof. Pesquisa Veterinária Brasileira 33(4):543-548. Departamento de Anatomia Veterinária, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Universidade de Brasília, ICC Ala Sul, Campus Darcy Ribeiro, Cx. Postal 4508, Brasília, DF 70760-701, Brazil. E-mail: limaemm@unb.br Differences in the microscopic morphology of the hoof in forelimbs and hindlimbs of horses have been scarcely reported in the literature, especially concerning the distribution of primary and secondary epidermal laminae in the different regions. This study aimed to determine the density of primary and secondary epidermal laminae in the hoof of horses. For this, it was used fore and hindlimbs of 16 adult mixed breed horses. With a cross section 0.5 cm above the sole, it was quantified the primary epidermal laminae in the regions of the toe, and of lateral and medial quarters. Fragments with about 1cm ³ were taken from the proximal, middle and distal thirds of the hooves, in the different regions, subjected to conventional histological techniques and examined with an optical microscope. Data were statistically analyzed in relation to the fore and hindlimbs and between their various regions. The density of primary epidermal laminae varied around the hoof circumference, with greater values in the hoof toe, which gradually decreased towards the bulb of the hoof, without difference between thoracic and pelvic limbs. The average density of the secondary epidermal laminae per primary epidermal lamina does not change around the circumference of the hoof. Our findings indicated that the density of epidermal laminae is not different between fore and hindlimbs. The variation in the density of primary epidermal laminae around the hoof seems to be part of an adaptive response to different stresses in each region. A better understanding of the structural morphology contributes to a better understanding of the diagnosis, pathophysiology, and treatment of disorders that affect the hoof.

• Epidermal laminae hoof lâminas epidérmicas casco

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Barreto-Vianna A.R.C., Oliveira L.S., Leonardo A.S., Santana M.I., Godoy R.F. & Lima E.M.M. 2013. Density of primary and secondary epidermal laminae of equine hoof. Pesquisa Veterinária Brasileira 33(4):543-548. Departamento de Anatomia Veterinária, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Universidade de Brasília, ICC Ala Sul, Campus Darcy Ribeiro, Cx. Postal 4508, Brasília, DF 70760-701, Brazil. E-mail: limaemm@unb.br Diferenças na morfologia microscópica dos cascos dos membros pélvicos e torácicos dos equinos têm sido pouco relatadas na literatura, principalmente no tocante a distribuição de lâminas epidérmicas primárias e secundárias nas diversas regiões. O propósito deste estudo foi quantificar a densidade de lâminas epidérmicas primárias e secundárias no casco de equinos. Foram utilizados membros torácicos e pélvicos de oito equinos adultos e sem raça definida. Em uma secção transversal de aproximadamente 0,5cm de altura da sola dos cascos foi quantificada a densidade das lâminas epidérmicas primárias tanto na região da pinça quanto dos quartos lateral e medial. Fragmentos com aproximadamente 1cm³ foram retirados dos terços proximal, médio e distal do casco, nas diferentes regiões e submetidos a técnica histológica convencional, a densidade de lâminas epidérmicas secundárias foi quantificada com auxilio de microscópio óptico. Os dados foram analisados estatisticamente em relação aos membros torácicos e pélvicos e entre suas diversas regiões. A densidade de lâminas epidérmicas primárias varia ao redor da circunferência do casco, sendo maior na região da pinça do casco e diminui gradualmente em direção ao bulbo do casco, não existindo diferença entre membros pélvicos e torácicos. A densidade média de lâminas epidérmicas secundárias por lâmina epidérmica primária não varia em torno da circunferência dos cascos, assim como, quando comparada entre os membros torácicos e pélvicos. A variação da densidade das lâminas epidérmicas primárias em torno do casco parece fazer parte de uma resposta adaptativa às diferentes tensões existentes em cada região. O melhor entendimento da morfologia das estruturas do casco contribui na melhor compreensão do diagnóstico, fisiopatologia e tratamento das afecções que as acometem.